内细胞团直径和囊胚直径之间的比值与 单囊胚移

发布日期：2017-06-27 16:00　浏览次数：47776

目的 ：通过time-lapse图片测量内细胞团(ICM)直径和囊胚直径的比值来评估预测单囊胚移植的临床妊娠结局的能力 设计 ：回顾性对照研究 地点 ：大学附属医学中心 病人 ：127位妇女行IC

目的：通过time-lapse图片测量内细胞团(ICM)直径和囊胚直径的比值来评估预测单囊胚移植的临床妊娠结局的能力

设计：回顾性对照研究

地点：大学附属医学中心

病人：127位妇女行ICSI治疗，共129个囊胚移植周期

干预：通过time-lapse显微镜对胚胎进行监控

主要的结局指标：单囊胚移植中ICM直径与囊胚直径的比值以及临床妊娠率

结果：Ⅰ期研究中，63位妇女的65个囊胚移植周期中有25例成功妊娠(40%)。成功种植囊胚的平均ICM/囊胚直径比值为0.487±0.086，而在未种植的囊胚中，该比值显著降低(0.337±0.086)。活婴出生率为29%(18/63)。Ⅱ期研究中，有64位妇女进行了64个囊胚移植周期。在每个移植周期中，测量ICM/囊胚直径比值，挑选最高比值的囊胚进行移植。43人(67%)成功妊娠，平均ICM/囊胚直径比值为0.46，其中36人(84%)生产出健康的婴儿。妊娠失败的21人(33%)，平均ICM/囊胚直径比值为0.45。结果阳性预测值为74%，阴性预测值为70%。

结论：在单囊胚移植中，ICM/囊胚直径比值可以预测临床妊娠率及活婴出生率，并且通过该方法可以简单地，非侵袭地挑选具有较高发育潜能的囊胚。

技术治疗的最终目标是使患者获得一个健康的婴儿。实现这一目标就要求我们能够准确地预测单个胚胎的发育潜能。与卵裂期胚胎相比，移植单个囊胚是最理想的选择，因为囊胚不仅与内膜具有更好的同步性，而且移植囊胚能获得较高的种植率。Gardner和Schoolcraft对囊胚建立了一套定性的形态学评分体系，主要包括三方面：囊胚的扩张和孵出程度，内细胞团(ICM)和滋养层细胞(TE)。Gardner等报道移植两个高评分的囊胚可获得69%的种植率和大于80%的临床妊娠率。当移植一个优质囊胚时，种植率和临床妊娠率分别能到50%和70%。近期有研究观察到囊胚形态定量测定结果与种植潜能具有相关性，并且发现ICM的大小和形状与囊胚的活力存在明显的关联。随着time-lapse技术的引入，能够更好进行连续动态地观察，并且大量的time-lapse变量可以预测胚胎的发育和种植潜能。

基于Gardner和Schoolcraft的囊胚评分体系以及time-lapse的形态动力学变量，该研究利用time-lapse显微镜拍摄的图片建立ICM的半定量测量方法。这种简单的方法能够有效地预测单个囊胚的种植潜能。

材料和方法

实验设计

Ⅰ期研究：回顾性分析了2012年12月至2014年12月在卡普兰医学中心(以色列)进行 治疗的所有妇女。

纳入标准：不考虑女方年龄、周期数和治疗原因，由女方自身获得的受精卵都培养在EmbryoScope(Unisense Fertilitech)，并且进行day5移植一个新鲜囊胚。

排除供卵周期以及day5没有囊胚形成的患者。

Ⅱ期研究：该研究开始于2014年10月，基于Ⅰ期的研究结果，利用ICM/囊胚的比值来预测囊胚的种植潜能。

纳入标准： 患者胚胎在EmbryoScope中培养至day5且当日移植。Day5没有形成囊胚的患者不纳入研究。只有患者的囊胚ICM直径达到可测量标准才纳入研究。

每个囊胚都需要测量，并且计算ICM直径和囊胚直径之间的比值。具有高比值的囊胚进行移植。

取卵后14天测定血清中beta-hCG的含量。移植后5周超声检查见子宫腔内妊娠囊及原始搏动即确定为临床妊娠。

卵巢刺激，拾卵，ICSI和培养条件

利用GnRH激动剂或拮抗剂对垂体将调和控制性卵巢刺激。给予hCG和/或GnRH激动剂约32-34小时后经阴道B超穿刺取卵。

ICSI前卵子培养在含有10%血清替代物的序贯培养基或Global Total受精液中，5.5%CO2，37℃。ICSI在含有HEPES缓冲液的溶液中进行，显微注射后的卵子转移至预平衡的EmbryoSlide培养皿中。每个卵子单独培养在25微升CSC或Global Total溶液中，并在time-lapse中培养至day5，期间不需要更换培养基。

囊胚评分，移植，和种植

Day1,2,3和5对所有的胚胎进行形态动力学标注。Day5时根据Gardner和Schoolcraft的囊胚评分体系对囊胚进行评分。

EmbryoViewer软件安装椭圆和测距工具可以容易地测量卵裂球和胚胎的面积和直径。但是，我们采用了外部图像处理软件来测量ICM和囊胚腔直径。囊胚扩张开始前就对图片中的囊胚进行测量。ICM直径定义为ICM顶端到底部的垂直距离。囊胚直径定义为滋养层外部边缘之间的距离。ICM/囊胚直径比值定义为ICM直径除以囊胚直径。

统计分析

二元logistics回归分析ICM/囊胚直径比值与临床妊娠率的相联。通过ROC曲线获得ICM/囊胚直径比值的截点值，作为预测方法。T检验用于评估两期研究期间和期内获得妊娠组及未获得妊娠组组间女方年龄间的差异以及ICM/囊胚直径比值的差异。

结果

Ⅰ期研究

研究期间共有114位患者进行132个囊胚移植，获得37例妊娠(28%/移植周期，32%/患者)。女方平均年龄为35±5.0岁。51例患者(45%)的囊胚处于囊胚形成初期，无法测得ICM的相对大小。在回顾性研究中，只有63例患者(55%)纳入研究。63例患者进行65次单囊胚移植，获得25例临床妊娠率(38%/移植周期，40%/患者)和29%活婴出生率(18/63)。成功种植囊胚的平均ICM/囊胚直径比为0.487±0.086，未种植的则是0.337±0.086(P<.00001)。种植组囊胚和未种植组囊胚的TE评分没有显著性差异。另外，女方平均年龄也没有差异。

Ⅱ期研究

Ⅱ期研究中囊胚的ICM/囊胚直径比值接近0.48就进行移植。64位患者进行64个单囊胚移植周期，移植的囊胚平均ICM/囊胚直径比值为0.46。43位成功妊娠(67%)，21位未妊娠患者的囊胚的平均ICM/囊胚直径比值为0.45，两组间比值没有统计学差异。

种植和未种植囊胚的TE评分没有统计学差异。另外，Ⅱ期研究中女方年龄没有差异，并且Ⅰ期和Ⅱ期研究间女方年龄也没有差异。两种不同培养基之间也没有差异。

43位成功妊娠的妇女中有36位(84%)生产出健康的婴儿，4位失访。

通过ROC曲线分析得到截点值为0.4255，敏感度和特异度分别为0.75和0.695。结果的阳性预测值为74%，阴性预测值为70%。

讨论

本研究结果表明在单囊胚移植中ICM/囊胚直径比值越高，临床妊娠率越高。该比值可以作为预测种植的重要参数。Richter等人的研究也报道了ICM测量值在day5扩张囊胚中的预测价值。不过该研究中平均的移植囊胚数为2.4个/患者，并且在time-lapse培养体系引入前几年就已经开展了此研究。研究是通过放大400倍利用目镜测微尺对囊胚的形态学特征进行测量，发现ICM面积>4,500μm2，种植率可达55%。显而易见，利用time-lapse显微镜可以避免温度及溶液pH值的波动。

研究中仅仅利用ICM/囊胚直径比值来挑选移植的囊胚，并没有采用其它早期的形态动力学参数作为评分标准。我们研究中所获得的67%临床妊娠率与Desai等人报道的相当。

另外，该研究并没有发现TE评分与种植潜能之间的相关性。这与Hill等人研究是不同的，他们的研究结果显示TE评分才是种植率和活婴出生率的重要预测因子。他们移植的囊胚处于不同的发育阶段，包括day5和day6从桑葚胚到正在孵出的囊胚。因为ICM是动态的，随胚胎发育而发生变化，所以ICM测量结果也会随时间而不同。本研究中的测量都是在连续的时间间隔下发生的，因而会更准确。Hill研究中TE评分最高的囊胚移植可获得57%的活婴出生率，而在我们的Ⅱ期研究中活婴出生率则达56%。

移植一个ICM/囊胚比值高于截点值0.4225的囊胚可以获得临床妊娠的条件概率为75%，这比用肉眼评估挑选囊胚所获得的临床妊娠概率更高。当然，影响种植能力的因素不仅包括囊胚本身的治疗，还有囊胚的整倍体情况和患者特征因素，例如年龄和内膜容受性。、

由于Ⅰ期研究为回顾性研究，具有回顾性研究的不足之处。本研究的突出点是单囊胚移植和活婴出生率为最终指标。值得一提的是，胚胎评分过程中不可避免地存在观察者自身和观察者间的差异。然而，通过软件进行图片处理大大降低了这些变量差异。

终上所述，研究支持ICM对种植和活婴出生具有重要的预测价值这一观点。另外，文中提供了一种只需通过使用ICM/囊胚直径比值的方法挑选具有高发育潜能的囊胚，该方法简单易行，且不会干扰胚胎发育过程。

文摘来源：Almagor, M., et al., Ratio between inner cell mass diameter and blastocyst diameter is correlated with successful pregnancy outcomes of single blastocyst transfers. Fertil Steril, 2016. 106(6): p. 1386-1391.

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